國典醫藥
搜索
1

蛋白質鑒定

  • 分類:質譜分析
  • 作者:
  • 來源:
  • 發布時間:2021-03-17 08:58
  • 訪問量:

【概要描述】基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜技術(Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight, MALDI-TOF)的基本原理是將分析物分散在基質分子中并形成晶體,當用激光照射晶體時,由于基質分子經輻射所吸收的能量,導致能量蓄積并迅速產熱,從而使基質和分析物共結晶升華進入氣相。MALDI所產生的質譜圖多為單電荷離子。MALDI產生的

蛋白質鑒定

【概要描述】基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜技術(Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight, MALDI-TOF)的基本原理是將分析物分散在基質分子中并形成晶體,當用激光照射晶體時,由于基質分子經輻射所吸收的能量,導致能量蓄積并迅速產熱,從而使基質和分析物共結晶升華進入氣相。MALDI所產生的質譜圖多為單電荷離子。MALDI產生的

  • 分類:質譜分析
  • 作者:
  • 來源:
  • 發布時間:2021-03-17 08:58
  • 訪問量:
詳情

蛋白質鑒定

  ● 分子量檢測

  ● 氨基酸序列分析(PMF)

  ● 未知蛋白鑒定

  ● 糖基化修飾肽段鑒定

  ● 翻譯后修飾鑒定

★ 蛋白質質譜鑒定技術原理和方法

MALDI-TOF

基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜技術(Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight, MALDI-TOF)的基本原理是將分析物分散在基質分子中并形成晶體,當用激光照射晶體時,由于基質分子經輻射所吸收的能量,導致能量蓄積并迅速產熱,從而使基質和分析物共結晶升華進入氣相。MALDI所產生的質譜圖多為單電荷離子。MALDI產生的離子常用飛行時間(TOF)檢測器來檢測,理論上講,只要飛行管的長度足夠,TOF檢測器可檢測分子的質量數是沒有上限的,因此MALDI-TOF質譜很適合對蛋白質、多肽等生物大分子的研究。

 

 

★ 技術特點

  ● MALDI-TOF 鑒定方便、快速,可以同時做上百個斑點

  ● 主要用于純蛋白或簡單樣本的鑒定,如SDS-PAGE斑點、2-DE斑點

  ● 成本較低

★ 樣品要求

  ● 蛋白質溶液:純度> 90%;蛋白質總量> 5 ug,濃度> 0.1 ug/ul

  ● 雙向凝膠電泳點:考染、銀染點清晰可見

  ● SDS-PAGE膠條:單一蛋白質,考染、銀染條帶清晰可見

★ 質譜技術的應用

1. 蛋白質純度分析以及分子量測定

MALDI-TOF是一種軟電離技術,可用于檢測目標蛋白或多肽是否存在,有無二聚體存在,以及進行純度情況的大體評估。MALDI-TOF鑒定分子量范圍也非常廣,能夠鑒定700-1000000Da的蛋白分子量,準確度高達0.1%~0.01%,遠遠高于目前常規應用的SDS電泳與高效凝膠色譜技術。

2. 蛋白指紋譜鑒定(PMF)

肽質量指紋譜(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)是蛋白質被識別特異酶切位點的蛋白酶水解后得到的肽片段的質量圖譜。由于每種蛋白的氨基酸序列(一級結構)都不同,當蛋白被水解后,產生的肽片段序列也各不相同,因此其肽質量指紋圖也具有特征性。將肽譜圖與數據庫中蛋白質理論肽譜圖對比,從而鑒定蛋白質。因此,分子質量的精確度是PMF的關鍵指標所在,但蛋白質的翻譯后修飾可能使PMF的質量數與理論值不符,從而對蛋白鑒定的準確度有一定影響。

3. MS/MS串聯質譜法測序

串聯質譜法(MS/MS),是目前常用的質譜鑒定方式。MS/MS先通過一級質譜測定肽段質量,再選取豐度高的肽段進行二級質譜分析,在二級質譜中肽段相互碰撞導致氨基酸鍵斷裂,產生肽段碎片離子經由檢測器分析,從而得到篩選肽段的氨基酸序列信息。MS/MS利用豐富肽段碎片的精確質量信息,更具有特異性、可信度,極大地增加了數據庫檢索的可靠性。

 

 

 

掃二維碼用手機看

暫時沒有內容信息顯示
請先在網站后臺添加數據記錄。
暫時沒有內容信息顯示
請先在網站后臺添加數據記錄。
公眾號二維碼

關注我們公眾號

公司地址:北京市經濟技術開發區科創七街29號院1號樓210室
聯系電話:
010-87227719

Email:contact@guidonpharmaceutics.com

國典(北京)醫藥科技有限公司

京ICP備18028173號

網站建設:中企動力 北京